由于多重分析的使用增加，对抗体偶联的需求也呈上升趋势。不仅传统和光谱流式细胞术等现有平台的反应板尺寸不断增长，空间生物学先进技术的发展也意味着可以通过新型免疫荧光 (IF) 和免疫组织化学 (IHC) 方法同时检测更多靶标。然而，虽然用荧光团、酶、金属离子或寡核苷酸标记的抗体需求量很大，但它们可能并不总是能从市场上买到。
当所需的接合物不是现成的产品时，研究人员可以借助自制 (DIY) 偶联试剂盒自己标记抗体。近年来，这种试剂盒因其带来的成本效益明显高于定制偶联服务而广受欢迎。不过，当今市场上的许多 DIY 抗体偶联试剂盒并不能保证所获得的接合物有效。
如果您想降低项目风险并加速发现，我们建议您考虑定制抗体偶联服务。
选择抗体偶联服务的五个原因
与使用 DIY 偶联试剂盒在内部标记抗体相比，利用定制抗体偶联服务可提供许多优势，包括节省成本和时间、提高接合物质量以及提高可重复性。
1. 提高接合物质量，从而获得更准确的结果
为了使偶联抗体在其预期应用中表现出最佳性能和一致性，一旦发生偶联反应，必须去除任何未结合的组分。游离染料和未偶联抗体的存在会人为地增加或减少测定信号，从而导致下游时间、试剂和样品材料的浪费。
除了这些众所周知的问题之外，许多 DIY 抗体偶联试剂盒在标记实验步骤中还不包括纯化步骤。如果缺少这样的步骤，应作为最终产品质量不合格且可能无法产生准确结果的警告。
纯化步骤的重要性如图 1 所示，该图将 CST 定制偶联的抗体与使用两个 DIY 偶联试剂盒标记后的相同抗体进行了比较。基于试剂盒的偶联后出现的高水平游离染料是引起担忧的原因，因为它们可能会转化为假阳性。
图 1. CST 定制偶联与市售抗体标记试剂盒。 使用 CST 方法对偶联的 FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb #9740 进行分析，并通过超高效的液相色谱法 (UHPLC) 与其他两家供应商的 DIY 试剂盒进行比较。与其他供应商的含有较高水平游离染料和碎片（可能干扰测定结果）的产品相比，CST 进行的生物偶联化学优化和严格纯化以去除游离染料和抗体，可产生更高质量的产品。
2. 更好的可重复性
许多 DIY 抗体偶联试剂盒实验步骤中缺乏纯化步骤，这会带来另一个限制，即难以确定标记程度。因此，无法确认接合物之间的可重复性，并且如果实验失败，也很难确定问题出在哪里。由于 DIY 抗体偶联试剂盒很少提示表征所得产品的有效方法，而这对于确保其可重复性能至关重要，这一事实加剧了这个问题。
“测试多家商业供应商的 DIY 偶联试剂盒后，我们发现回收的偶联抗体量和偶联过程中游离染料/抗体的量不一致，”CST 定制偶联团队负责人 Lisa Arvidson 解释道：“这意味着每次您使用 DIY 偶联试剂盒时，您可能会得到不同的产品，因此可能导致无法重复的结果。我们的客户也报告了类似的发现，甚至包括以前效果良好的偶联反应完全失败的情况。”
图 2 显示了 CST 偶联专家通过市售的 DIY 偶联试剂盒获得的不一致结果。
图 2. DIY 偶联试剂盒性能比较。使用 FGFR1 (D8E4) XP Rabbit mAb #9740 和用 Alexa Fluor® 的 CFGB 488 标记的商用 DIY 偶联试剂盒（无纯化步骤）进行三个单独的偶联反应。在每种情况下，标记抗体、游离抗体和游离染料的量均不同，从而导致偶联不一致。
3. 更高的产量意味着更低的成本
选择定制偶联服务的一个主要优势是您无需为偶联过程中丢失的抗体付费。我们发现，即使具有偶联经验的科学家严格遵循试剂盒方案，DIY 试剂盒的平均产量也仅为所用抗体试剂总量的 30%。在您开始使用标记抗体进行研究之前，这意味着一笔巨大的费用。再加上许多抗体需要浓缩或进行缓冲液交换才能进行偶联，成本很快就会上升。
“虽然单个 DIY 试剂盒可能比偶联服务便宜，但即使不考虑花费的时间和实验室资源，总成本也可能更高，”Lisa 解释道。
4. 显著节省时间
除了进行偶联反应有时需要一天以上之外，研究人员如果选择使用 DIY 试剂盒，还必须投入更多时间来确认偶联是否有效。通常，这包括排查问题，以确定实验失败是由于偶联反应还是标记抗体所造成，而这可能导致项目时间延长数周甚至数月。
相比之下，当您使用自定义偶联服务时，您已经知道偶联已成功，可以立即继续优化您的特定模型系统。
“归根结底，实验室经理希望他们的团队专注于实验，而不是制造接合物，”Lisa 说。
5. 压力更小，结果更稳定
稳定的检测性能需要可靠的偶联，而 DIY 偶联试剂盒无法保证这一点。通过选择定制偶联服务，研究人员知道他们将一次又一次地获得一致的、高质量的接合物，从而消除了实验系统中潜在的变异来源。
“当您使用偶联试剂盒时，可能会感到压力很大，因为没有犯错的余地，”Lisa 说：“大多数试剂盒只含有足够单次偶联的试剂，所以如果您犯了错误，就必须扔掉该试剂盒并购买一个新的试剂盒。由于大多数 DIY 偶联试剂盒方案通常都很复杂且冗长，并且对于不熟悉偶联的科学家来说可能会感到陌生，因此在获得成品之前，您不太可能会尝试几个试剂盒。”
利用 CST 的定制偶联服务推进您的研究
与使用 DIY 抗体偶联试剂盒相比，定制偶联具有许多优势。这些优势包括改善的接合物质量、更好的实验可重复性和更高的产量，以及节省时间和金钱。
CST 提供广泛的定制偶联服务，所有这些都保证为您的研究提供高质量的试剂。通过标配纯化、快速周转时间以及大规模扩展的能力，我们可以帮助您推进项目。
了解我们所提供的定制偶联服务的更多信息，并随时联系我们。
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