星期五晚上，您本来可以和您的朋友一起出去玩，但您却被困在一个摆满显微镜的黑暗小房间里。 在实验室度过一个晚上在当时似乎是一个不错的选择，因为您确信该免疫组织化学 (IHC) 会向您揭示一些微小但重要的宇宙奥秘。但此刻您呆坐着这里，诅咒着宇宙和宇宙中的每个人，因为您盯着显微镜时看到的所有东西都模糊不清。对照是否有效？
没有像想象的那样。你失败了。
接下来要怎样？如果你像我一样，你就会将玻片扔进垃圾桶里，重新振作起来去找你的朋友们。明天再重新评估实验吧。
你要从哪里开始呢？您或许知道一个高度特异性、高亲和力的一抗是成功进行 IHC（免疫组织化学）的关键。但你是否知道决定系统 pH 值和离子强度的配套试剂（即缓冲液等）也同样重要？这些试剂会影响一抗结合其表位，还会显著影响检测结果。
为了帮助你选择最适合你的实验的试剂（以及确保呆在实验室的这几个周五夜晚都是值得的），我们将在接下来的几篇文章中回顾配套试剂会如何影响 IHC（免疫组织化学）。例如，我们会讲述我们对优化其中一种抗体 — PLK1 (208G4) Rabbit mAb #4513 的实验步骤的经验。
在我们首先测试这个抗体时，根据我们的标准实验步骤（图 A），它无法产生信号。逐一更换配套试剂后，我们可以在不改变一抗稀释系数的情况下，产生一个较强的纯净信号。
福尔马林等交联固定剂常用于制备 IHC（免疫组织化学）样品，因为它们会保留组织的结构完整性，有助于维持组织架构。遗憾的是，这些固定剂可能会隐藏你的抗体要检测的表位。
有几种方法可用来显示在固定过程中被隐藏的表位。这些方法包括依赖于蛋白酶 K 等酶的蛋白水解诱导抗原修复法，或者利用热来解开交联键和分解蛋白的热诱导表位修复法 (HIER)。其中任意一种方法都能显示表位，使它更容易结合一抗，更顺利地进行 IHC（免疫组织化学）染色。
在 CST，我们最常用的抗原修复方法是 HIER，因此这就是我们将要详细探讨的方法。HIER 涉及对组织切片进行加热和冷却，同时要将它们浸没在有明确缓冲能力的溶液中。缓冲液的 pH 值 有助于在温度恢复至正常水平后保持蛋白解旋，因此系统 pH 值范围应根据目的抗体-表位相互作用进行优化。微酸性缓冲液柠檬酸 (pH 6.0) 能有效修复各种表位，但有些表位可能需要偏碱性的缓冲液，如 EDTA (pH 8.0)。
我们使用柠檬酸缓冲液进行 HIER，同时优化 PLK1 (208G4) 兔单克隆抗体 实验步骤，因为它适用于最广泛的表位。尽管我们逐渐更换为其他配套试剂，但会始终使用这种方法。
如需更多有用的提示，请点击下面的按钮下载“成功进行 IHC 的指南”。