免疫组织化学法 (IHC) 是检测生物标记物表达的最简单方法，同时还能维持组织内的空间环境。您知道，是否能获得可靠的 IHC 染色结果取决于您抗体的特异性和性能。这些都是高风险实验，并且您希望绝对确信您的抗体能检测目的靶标。
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这是方法验证的价值所在。但需要 IHC 验证什么呢？单种检测法不足以确定特异性，因此需要一个综合数据包。
在这个视频中，我们将探讨多种可收入该数据包的不同 IHC 验证方法。
Cell Signaling Technology 的科学家在 IHC 等大量应用中进行内部抗体开发和验证。当您选择 CST 的某种经 IHC 验证的抗体时，您就会知道它已经过我们 IHC 团队全面检测和批准。此外，您还可在 cellsignal.com 上查看相关验证数据以及我们用于验证特定抗体的推荐实验步骤和配套试剂，因此您可以在实验中放心使用。
让我们深入了解 CST 对所有抗体进行 IHC 验证所采用的不同方法。
通过比较已知有不同靶标蛋白表达水平的细胞系，使用石蜡包埋的细胞沉淀物评估抗体特异性。或者，可以使用 siRNA 或 shRNA 实验来改变靶标表达，并比较对照和基因敲除细胞沉淀物的染色情况。
在总抗体和磷酸化特异性抗体的验证过程中，还可用小分子激活剂或抑制剂处理来调节靶标表达。细胞沉淀物经配体处理后，还会诱导或抑制表达，从而调节靶标蛋白，或（如下所示）改变其定位。
Cell Signaling Technology 的科学家还使用多种组织进行 IHC 验证。进行抗体滴定以确定最佳抗体稀释度，信息见我们的产品数据表和网页。
抗体验证包括对已知表达不同靶标蛋白水平的多种组织类型进行比较，以评估抗体在广泛组织中的特异性和性能。对相关人组织样品进行免疫组织化学分析，以检测可识别疾病相关靶标的人反应性抗体。对于小鼠反应性抗体，验证时可使用正常小鼠组织、同源肿瘤或其他小鼠模型。
在 IHC 中，可在适当时间点用激活剂、抑制剂或封闭肽处理，以控制靶标表达，并验证修饰特异性。用封闭肽孵育可测试 IHC 中的抗体特异性，并可作为其他验证测定法的补充。
要检测磷酸化特异性抗体，使用磷酸酶清除蛋白中的磷酸基团，从而确定磷酸化特异性。在样品制备之前进行药物处理还可控制靶标蛋白表达和翻译后修饰的水平。在此例中，对小鼠异种移植物系统用 rapamycin 处理。
抗体验证很重要，但再强调一次，仅靠单种检测法不足以确定特异性。将多种验证测定法纳入 IHC 数据包中，可确保您使用每种 CST 抗体观察到的染色均具有特异性且可信。
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