我们实验室中经常使用一种抗体，以至于我们每个人都有自己的大量库存！这个抗体就是 S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAb #2217，利用的就是源自 5G10 的独特抗原。该博客将讨论我们如何使用 5G10 作为样本质量的标识以及 IF 实验操作的指标。通过这种方式，5G10 可以帮助我们获得最优质的数据和图像。我们希望您能够在实验室中使用这些技巧来增强对结果的信心。
5G10 抗原的独特成分在于，它富含对醛敏感的赖氨酸残基，使该抗体的结合对甲醛固定敏感。这是由用甲醛固定细胞的内部测试经验所得，但福尔马林固定石蜡包埋样品的情况并非如此（可能是因为会对此类样本进行抗原修复）。这些测试的结果表明，5G10 仅在样品用 4% 甲醛固定 5 至 30 分钟时才有效。如下图所示，固定不足或固定过度将无法产生足够的信号。5G10 如无法染色 S6 ，则提示样品可能固定不足或固定过度。样本固定不当也会导致其他抗体产生次优结果。
这在染色组织时特别有用。不同器官的不同固定速率意味着，如果全部一次固定，它们就可能达到不同的固定状态。这在文献中被称为“渗透-固定-悖论”（1）。通常，我们在使用啮齿类动物模型时采用灌注固定。这种方法虽然比浸泡固定快得多，但如果操作不当，也会产生甲醛渗透的变异性。整个组织的 5G10 阳性染色使我们确信样品以固定合适。下图描述了来自两个不同肝脏的切片中不一致的 S6 信号。右侧图像中 S6 信号弱且参差不齐，表明该组织的固定程度不在合适范围，因此不能用于 IF 染色。左图显示了在固定妥当的肝脏中预期的 S6 信号，表明该组织具有令人满意的使用质量。
5G10 还有另外一招！该抗体的低强度信号可能并不总是固定不当的结果，而是缓冲液 pH 值不合适。缓冲液制备是一个经常被忽略的元素：它在IF中，可以成事，也可以败事。在下面的实验中，我们表明了降低缓冲液 pH 值如何对 5G10 的信号强度产生负面影响。综合其对固定的敏感性，该抗体能成为染色过程的全面对照。
在本博客文章中，我们讨论了 S6 Ribosomal Protein (5G10) Rabbit mAb #2217 的实用性，即作为验证 IF 染色效果的手段以及组织正确固定的指征。在 CST 的 IF 小组中，我们致力于获得最高质量的数据；在我们所有的免疫荧光实验中，将 5G10 用作对照是我们所用的方法，以帮助确定样品固定或染色实验步骤中的问题。希望您也可以在后续实验中尝试使用 5G10 作为对照！
（1）Thavarajah，Rooban 等人“Chemical and physical basics of routine formaldehyde fixation.”Journal of oral and maxillofacial pathology : JOMFP vol. 16,3 (2012): 400-5. doi:10.4103/0973-029X.102496