如你的蛋白印迹膜要用 TBST 洗涤三次，则首次洗涤可将计时器设为五分钟。现在该怎么办？当然，你可以在午餐前 30 分钟检查你的邮件或社交媒体。或者，你可以做有益的事情，比如查看某个 CST (Cell Signaling Technology) “技术提示”视频！
这是一个新的短视频系列，开发和验证 CST (Cell Signaling Technology) 抗体的科学家们在此提供见解和实验步骤提示。
这个 CST“技术提示”视频研究您的膜封闭用蛋白质选择 — 脱脂奶粉与牛血清白蛋白 (BSA) — 如何影响您的蛋白质印迹结果。
在视频中，CST 的产品科学家 Srikanth Subramanian 博士介绍了膜封闭用蛋白质选择的注意事项，包括乳中磷酸酶是否会影响您的信号。
我们会在此处的博客上发布更多“技术提示”视频，但如果你有 YouTube 帐号，请确保查看“技术提示”播放列表并订阅，以便上传新视频时通知你。
我应该使用哪种蛋白质封闭蛋白质印迹法的转移膜？我叫 Srikanth，是 Cell Signaling Technology 的一名产品科学家，接下来的是 CST 技术提示。
关于蛋白印迹实验，我们经常遇到的一个常见问题是，我该用什么来封闭，牛奶或 BSA？封闭步骤的目的是减少因非特异性结合而产生的背景量。BSA 仅由一种蛋白组成，即 60 kDa BSA，而牛奶则由许多大小不一的蛋白构成。因此，你可以有更大的机会来减少更多的背景结合。
我们建议你用经 TBST 稀释的 5% 牛奶，在室温下摇晃一小时，来封闭我们的所有非偶联一抗。这包括磷酸化特异性和总抗体。现在，我已经听到有点击、评价和标签询问“牛奶中的磷酸酶会怎么样？”。是的，有一些文章反对使用牛奶来检测磷酸化信号。
我来强调一下，在我们的所有内部检测中，我们未发现任何这样的问题。CST (Cell Signaling Technology) 科学家们进行了这么多次蛋白印迹实验，我们每天至少要配制一次牛奶，有时甚至一天配制多次。不过，如果牛奶缓冲液放置了一周、两周甚至更长时间不使用，那么磷酸酶影响信号的机率将会增加。但再次强调，我们没有看到任何这些影响，因为我们每天都使用新鲜的牛奶缓冲液。
这些是在 PDGF 处理的 3T3 细胞的裂解物上测试的产品 Phospho-Akt (Thr308) (D25E6) XP® Rabbit mAb #13038 的图像。印迹之间的唯一区别是一张膜用牛奶封闭，另一张膜用 BSA 封闭。显然，用 BSA 封闭的膜的背景更高。然而，采用乳中封闭的膜时，磷酰信号仍然很强且清晰。
因此，封闭膜后，请参阅该产品的专用数据表，了解建议的抗体结合缓冲液。这一般是牛奶或 BSA，但取决于特定抗体。我希望这有所帮助。全部应用特定的实验步骤可在 cellsignal.com 具体产品页上找到。如果您有任何其他问题，请通过 cellsignal.com/support 随时联系 CST 的任何科学家。
如需更多 CST (Cell Signaling Technology) “技术提示”视频，请在我们的 YouTube 页上订阅。祝你们实验成功，我们下次再见！谢谢。
Cell Signaling Technology、CST 和 XP 均是 Cell Signaling Technology, Inc. 的商标。