网络研讨会：对癌症干细胞标记物 CD133 验证不依赖于糖基化的抗体
摘要
癌症干细胞假说是假定一群自我更新的肿瘤起始细胞（称为癌症干细胞 (CSC)）可能是促成肿瘤异质性、转移、治疗抗性和/或肿瘤复发的原因。因此，鉴定和检测假定 CSC 的工具对癌症研究领域具有重要价值。CD133 是一种 5 跨膜 (5-TM) 细胞表面糖蛋白，它在多种肿瘤类型的假定 CSC 中显示出表达升高。许多研究使用 CD133 抗体分离假定的 CSC 来进行检测、体外培养、移植和药物发现研究。但最常用于研究 CD133+ CDC 的抗体是针对糖基化 CD133 表位培养的；这是有问题的，因为 CD133 的糖基化状态会根据环境条件（如缺氧）或细胞分化状态而有所变化。
此外，提供的抗 CD133 抗体尚未经严格的免疫组织化学验证，这对于理解 CSC 原位生物学非常关键。为了解决这个问题，我们开发了一种重组兔单克隆抗体，抗体可以靶向不依赖于糖基化的胞外 CD133 表位。这种试剂 [CD133 (D4W4N) XP® Rabbit mAb] 已经过严格的蛋白免疫印迹和免疫组织化学验证，结果表明，CD133 蛋白在不同细胞和组织类型中均出现稳定和特异性染色。希望这种试剂的进展能够加快，以说明假定的癌症干细胞对肿瘤发生、转移、治疗抗性和复发的作用。
方法
单克隆抗体的产生
CD133 (D4W4N) XP® Rabbit mAb #86781 是一种重组兔单克隆抗体，在 Cell Signaling Technology, Inc. 使用获专利的 XMT® 技术产生。
蛋白质印迹法
如图例所述，使用细胞或组织提取物进行蛋白印迹分析。蛋白印迹实验步骤详细信息可在 http://www.cellsignal.com/wbprotocol 上找到
免疫组织化学 (IHC)
对石蜡包埋的组织切片脱蜡、再水化，然后在 pH 为 6.0 的柠檬酸钠中进行抗原修复。一抗在 4°C 下孵育过夜。使用 SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) #8114 和 SignalStain® DAB Substrate Kit #8059 检测。
总结
CD133 (D4W4N) XP® Rabbit mAb：
一种重组兔单克隆抗体，可在蛋白印迹实验和 IHC (免疫组织化学) 中检测人 CD133 蛋白，具有出色的特异性和敏感性。
CD133 的检测不依赖于蛋白糖基化状态（通过蛋白印迹实验确定）。
可用于检测或显示人细胞裂解物或福尔马林固定石蜡包埋的 (FFPE) 人正常和肿瘤组织中的 CD133。
与提供的抗 CD133 抗体相比，在 IHC (免疫组织化学) 中显示出更高的敏感性。