蛋白印迹实验可用抗体来检测蛋白并分析它们的表达,但确实有其局限性。流式细胞术也使用抗体,但它可使用荧光来检测和分析每个细胞的蛋白表达。
流式细胞术可用于在单细胞水平下对蛋白表达、信号转导状态和物理特性(细胞大小/粒度)进行定量分析。现代流式细胞分析仪能够在异质混合物中每秒从数千个细胞中采集多种蛋白的数据。虽然流式细胞术通常用于通过检测细胞表面表达的表型标记物来识别细胞类型,但它也可用于检测胞内信号转导活动。
研究细胞信号转导:从蛋白质印迹法转换为流式细胞术
探讨信号转导机理的研究人员通常从蛋白印迹 (WB) 实验开始。在这种技术中,合并裂解物,一次分析一种蛋白,由于检测敏感性不足,可能会遗漏不频繁的信号转导活动。在蛋白印迹实验中进行多参数定量分析的能力有限。另一个缺点是可能需要一天或更长时间才能完成工作流程。
流式细胞术是一种避免这些缺点的理想解决方案,可在短短几个小时内对信号转导活动进行多重定量分析,并且其灵敏性和精确度优于蛋白印迹实验。重要的是,通过从单个细胞中采集离散数据点,流式细胞术使研究人员能够检测和定量显示出特定信号转导反应的细胞亚群,以探索这些细胞中的反应范围,并关联多个定量读取值。简而言之,信号转导流式细胞术让您能够提出新的研究问题,并检测从质膜到胞核的重要信号转导活动。
分析信号转导事件的优势 |
流式细胞术 |
蛋白质印迹法 |
研究单细胞分析 | 是 | 否 |
检测不频繁或罕见信号转导活动的能力 | 高 | 低 |
检测发生信号转导变化的亚群 | 是,同时 | 仅在细胞群分离/富集步骤之后 |
多参数分析 | 是 | 否 |
通量 | 高 | 低 |
检测时长(样品制备到分析) | 2-4 小时 | 1-2 天,取决于一抗孵育时长 |
信号转导定量 | 是,同时 | 因设置而异: - 传统胶片方法,否 - 数字成像仪,是 |
该视频介绍了四种值得使用流式细胞术代替蛋白质印迹法的情况:
开始流程
CST 提供了用于流式细胞术的多种抗体和试剂选择,支持细胞内信号转导途径和表型的定量分析。凭借在抗体设计、偶联和流式细胞术方面的专业知识,我们能够满怀信心地开发和验证您可以在您的流式细胞术实验中使用的抗体。同时,开发和验证我们流式细胞术产品的科学家还提供技术支持,以确保您的实验取得成功。