特邀博客作者 Charles Haitjema 博士是 Bio-Techne 的研究领域经理。这篇博客文章详细介绍了经过验证用于 ProteinSimpleTM（Bio-Techne 的一个品牌）的 Simple WesternTM 系统上的 Cell Signaling Technology 抗体。
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我们很高兴将 Simple Western 作为已验证的应用加入 CST 的高品质抗体目录。现在，Simple Western 用户可以在 CST 网站上以 Simple Western 作为应用进行过滤，从而轻松找到经验证的抗体——其中数百种抗体已经过验证，而且经验证的抗体数量还在不断增加。
什么是 Simple Western？
Simple Western 是一种在 Jess™、Abby™、Peggy Sue™、Sally Sue™ 和 NanoPro™ 1000等台式仪器内部自动化的毛细管电泳免疫测定法（图 1）。作为开放式免疫测定平台，Simple Western 用户可以选择任何商业化或定制化抗体以特异性检测靶标蛋白和蛋白质同工型。自 2009 年推出第一台自动化蛋白质印迹仪以来，Simple Western 用户一直非常依赖 CST 的广泛类型高品质一抗来开发他们的测定法。
图 1. Simple Western 仪 Jess（左图）和 Peggy Sue（右图）。Jess 执行基于大小的毛细管电泳免疫测定，在化学发光信道和 NIR/IR 荧光信道中进行多信道多重分析。Peggy Sue 凭借化学发光检测进行基于大小或基于电荷的毛细管电泳免疫测定。Jess 在三小时内处理多达 25 份样品，而 Peggy Sue 一夜间处理多达 96 份样品。ProteinSimple 友情提供图片。
针对 Simple Western 验证过的 CST® 抗体
CST 是一家由科学家为科学家们创立的公司，在信号转导方面历史悠久。确保抗体经过严格验证以用于每种应用类型是我们公司的核心原则之一，也是 CST 几十年来一直是 WB 抗体的首选供应商并荣膺十年 CiteAb 抗体供应商的原因。
针对 Simple Western 验证过的 CST 抗体可让您跳过为自身实验确定最佳分析条件的优化步骤。CST 的产品科学家和 Simple Western 的专家已经为您执行了这一步，因此您在开始实验之前就知道了获得最佳结果的理想稀释倍数。
您可在每种 Simple Western 已验证抗体的产品数据表和产品网页中，找到启动和运行所需的一切：
Simple Western 克服了诸如蛋白质印迹法和 ELISA 等免疫测定法的局限性
顾名思义，Simple Western 执行蛋白质印迹样分析，是市场上提供全自动蛋白质印迹工作流程的唯一平台，除节省时间和成本外，还提供高度可重复性、灵敏度和定量。
那么，蛋白质印迹法与 Simple Western 之间有何差异？首先，Simple Western 在样品制备和反应板上样后完全自动化。传统蛋白质印迹法的手动步骤在自动化毛细管台式仪器内部得到精确控制。Simple Western 使用毛细管电泳 (CE) 代替 SDS-PAGE 凝胶，从而使用 CE-SDS 按分子量（大小）或使用 cIEF 按等电点（电荷）分离蛋白质（图 2）。
图 2. Simple Western 在毛细管内进行免疫分析。使用 CE-SDS（左小图）按大小或使用 cIEF（右小图）按电荷分离样品。所有步骤即基质和样品上样、分离、免疫探测和信号定量，均在精确受控的毛细管环境下自动化。ProteinSimple 友情提供图片。
无法凭借传统蛋白质印迹法获得的可重复性全定量数据
一旦蛋白质分离完成，蛋白质共价固定到毛细管壁上，传统的蛋白质印迹步骤（如洗涤、抗体孵育和免疫检测）紧接就在毛细管中平顺续进行，无需用户干预（图 2）。因此，Simple Western 消除了传统蛋白质印迹法中凝胶到膜的转移步骤。一旦运行完成，数据自动显示在 Compass for Simple Western 软件中。通过在精确受控的毛细管环境自动执行传统蛋白质印迹步骤，Simple Western 可生成全定量、高度可重复数据，动态范围高达 6 个对数且 CV 始终低于 15%。
优势不止于此。与蛋白质印迹法相比，Simple Western 只需要一点儿样品量（少至 3 µL），并且 Jess 仪和 Abby 仪在短至三时内处理 25 份样品。Peggy Sue、Sally Sue 和 NanoPro 1000 一夜处理 96 份样品，并且可以每 5 µL 样品生成多达八个数据点。Jess 用户可以在化学发光信道和 NIR/IR 荧光信道中选择灵活的多重分析检测策略（图 3）。用于 Jess 的 Stellar™ NIR/IR 模块提供业界领先的检测灵敏度，比竞争力最接近的荧光蛋白质印迹成像仪灵敏 100 倍。寻找准确的蛋白质表达测量？Simple Western 提供了同步检测总蛋白（图 3），不需要使用不可靠的管家蛋白进行数据标准化，并允许更准确测量蛋白质表达。
图 3. 在Jess 上使用 Stellar 测定法对未分化型 iPSC 的和 iPSC 衍生中胚层细胞的总 Akt、磷酰Akt 和总蛋白进行 Simple Western 分析。使用 Stellar NIR/IR 模块检测靶向总 AKT (#58295) 和磷酸化 Akt (#9271) 同工型的 CST 抗体，并使用 Stellar 总蛋白模块在化学发光信道同步检测总蛋白。ProteinSimple 友情提供图片。
Simple Western 甚至用 Jess 和 Abby 上的 RePlex™ 功能，消除了传统蛋白质印迹法的剥离和再探测步骤。RePlex 紧接着在同一毛细管中执行序贯免疫测定法，以便可以在同一样品中探测更多目标。由于样品共价固定到毛细管壁上，所以RePlex 在探测循环之间完全且可重复性地移除抗体。因此，不同于蛋白质印迹法的剥离和再探测步骤，RePlex 测定法不受信号干扰或探测循环之间的样品损耗影响。第二循环也可用于总蛋白检测，以归一化蛋白表达数据（图 4）。
图 4. 在 Abby 上使用 RePlex 测定法对未分化型 iPSC 和 iPSC 衍生中胚层细胞的总 Akt、磷酰 Akt 和总蛋白进行 Simple Western 分析。RePlex 的探测 1 中使用靶向总 AKT (#58295) 和磷酸化 Akt (#9271) 同工型的 CST 抗体，并在 RePlex 的探测 2 中检测总蛋白。ProteinSimple 友情提供图片。
Simple Western 对比 ELISA：基质效应更小，测定法开发更简单，外加分离蛋白质
在分析组织匀浆等复杂样品类型时，ELISA 用户经常遇到来自样品基质的干扰（称为基质效应），它会使结果发生偏差。相比之下，Simple Western 使用专有化学方法在分离后使样品分析物结合到毛细管壁上。这个步骤甚至在复杂基质内部发生共价结合，减少ELISA 中使用特异性捕获抗体捕获样品分析物时可能发生的基质效应。共价固定样品后，Simple Western 在免疫检测之前优化的缓冲液环境下从毛细管中冲去样品基质，从而进一步降低基质效应。
此外，夹心型 ELISA 的定制开发可能有挑战性，因为需要识别并验证两种成对抗体，而非仅仅针对目的靶标有反应性的单一抗体。Simple Western 只需要一种靶标特异性抗体即可特异性检测，与定制 ELISA 开发相比，这简化了测定法开发并缩短开发时间。此外，Simple Western 上按大小或电荷分离，结合免疫检测的特异性，这让您以高分辨率区分靶标蛋白的不同同工型（图 5）。与用于检测脑组织匀浆样品中人 eNOS 的领先性商业化 ELISA 试剂盒直接比较时，Simple Western 在分析范围和灵敏度方面表现出色，而与 Simple Western 相比，ELISA 似乎低估 eNOS 浓度（表 1）。
图 5. 使用靶向人 eNOS (#5880) 的 CST 抗体对人脑组织匀浆进行 Simple Western 分析。ProteinSimple 友情提供图片。
表 1. 比较 ELISA 和 Simple Western 测定法对脑组织中 eNOS 的定量。
利用 Cell Signaling 技术扩展 Simple Western 的潜力
Simple Western 是一项经证实的技术，在各种应用中拥有先进的研发工作流程，包括细胞和基因治疗、癌症和免疫肿瘤学、蛋白质生物加工、细胞信号转导和信号转导分析、定向蛋白降解、疫苗开发、神经科学和神经退行性疾病、传染病等等。
种类庞大的高品质量的 CST 抗体对 Simple Western 取得成功起到重要作用 — 近 500 篇 Simple Western 出版物以 CST 的抗体为特色，约占所有 Simple Western 出版物的 25%。Simple Western 作为应用加入 CST 目录后，Simple Western 用户可更快优化其测定法开发过程。
作为这种合作伙伴关系的一部分，将继续针对 Simple Western 验证用于研究重要分子信号转导通路的更多修饰状态特异性抗体，因此请务必使用以下链接回顾更多信息：
其他资源：
- 阅读新闻稿，以了解关于 CST 与 Bio-Techne 之间合作伙伴关系的更多信息。
- 了解关于 CST 抗体验证原则的更多信息。
- 了解关于 Simple Western 的更多信息。
Cell Signaling Technology 和 CST 是 Cell Signaling Technology, Inc. 的注册商标。ProteinSimple、Simple Western、Jess、Abby、Peggy Sue、Sally Sue、NanoPro、Stellar 和 RePlex 是 ProteinSimple Corporation 的商标。所有其他商标均归其各自所有者所有。请访问 cellsignal.com/trademarks 以了解更多信息。
沪公网安备31011502018823号