CST 博文: 实验室展望

Cell Signaling Technology® (CST) 的官方博客,我们在此讨论您从工作台上可期望获得什么,分享提示、技巧和信息。

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简化多功能干细胞识别

试剂验证和实验可重复性对于推进任何科学学科的研究都是至关重要的。由于这项研究固有的生物学复杂性,在(诱导的)多能干细胞研究中获得可重复性的数据提出了特别艰巨的挑战。重新编程细胞,然后将其引导至不同分化途径的过程充满了技术挑战,其中最重要的是事件的复杂性和使细胞趋向所需状态所需的相互作用。

在整个过程中,需要进行很多确认。研究人员如何确定诱导的多能干细胞实际上变成了预期的用途?研究人员过去不得不使用功能测定法来确定多效性,但现在可以使用免疫组化标记物可靠地评估多效性并评估分化能力(三系分化潜能)。

我们遇到了莱顿大学医学中心 iPSC 核心课程的助理教授兼共同负责人 Harald Mikkers 博士,他每天与 iPSC 一起工作,并与我们在 CST 一起合作克服了其中一些挑战。

“在莱顿大学医学中心的人类 iPSC 酒店,我们为客户(LUMC 研究人员以及外部商业和非营利组织)提供了细胞重编程服务。我们分离并扩增源自主要供体材料(例如皮肤、外周血和尿液)的细胞。用 mRNA、游离 DNA、慢病毒载体或仙台病毒将分离的原代细胞重编程为诱导性多能干细胞(iPSC)。

对生成的 IPSC 克隆进行多效性状态和功能性多效性评估。为此,我们分析了 iPSC 克隆中多能干细胞标志物的表达,并确定了它们分化为代表三个胚层的细胞的能力。使用荧光免疫染色定性评估三谱系分化潜力。

为了加快我们的工作流程,我们开发了一种三谱系抗体试剂盒,该试剂盒由直接结合的针对外胚层、内胚层和中胚层标记物的 CST 抗体组成。结合(层级: 4 度标记)由 CST 的定制偶联服务执行。结合成功率很高,超过 90% 的结合产生的抗体在免疫荧光显微镜实验中表现完美,其稀释度与 CST 推荐的各自未结合的一抗非常相似。定制偶联抗体的代表性实例如下所示。总之,一组确定的一抗的结合允许多效性的成本和时间效益表征。

20-CEP-79173 Fig 1

LUMC0183ICTRL01 的 Ectoderm 分化。用于检测 Ectoderm 的抗体为: 35884 Nestin (10C2) Mouse Mab (Alexa Fluor® 488 Conjugate)、42571 FABP7 (D8N3N) Rabbit Mab (Alexa Fluor® 555 Conjugate)84052 PAX6 (D3A9V) XP® Rabbit Mab (Alexa Fluor® 647 Conjugate)。

20-CEP-79173 Fig 2

LUMC0183ICTRL01 的内胚酶分化用于检测 Endoderm 的抗体是:96823 EOMES (D8D1R) Rabbit Mab (Alexa Fluor® 488 Conjugate)、50079 FoXa2/HNF3β (D56D6) XP® Rabbit Mab (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 和 66309 GATA-4 (D3A3M) Rabbit Mab (Alexa Fluor® 647 Conjugate)。

20-CEP-79173 Fig 3

LUMC0183ICTRL01 的 Mesoderm 分化用于检测 Mesoderm 的抗体是: 94663 BRACHYURY (D2Z3J) Rabbit Mab (Alexa Fluor® 488 Conjugate)、84638 CDX2 (D11D10) Rabbit Mab (Alexa Fluor® 555 Conjugate) 和 9856 Vimentin (D21H3) XP® Rabbit Mab (Alexa Fluor® 647 Conjugate)。€‚

也许我们与 Harald 共同开发的抗体组也可能受益于您的研究。可能采用类似方法验证您实验中的细胞。

您的研究可从必要的但难以生产的试剂中受益吗?让我们了解您的研究困境;我们来帮助您!

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