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裂解液的最佳使用方法

细胞裂解液的制备对于许多测定方法的成功至关重要,包括使用抗体指示蛋白表达的相关实验技术。理想情况下,从裂解液收集到分析的整个样品制备过程中,您感兴趣的蛋白质都应得到很好的保存,并免受蛋白酶和磷酸酶的作用。正确储存和处理裂解液对避免降解和维持检测蛋白质的能力至关重要。

20-CEP-79213 HERO 图片


在收集和组织诸如蛋白质印迹分析等实验的裂解液时,请牢记以下几点。

  • 尽快使用已制备的裂解液,并尽可能短暂地存储。 

  • 裂解液应尽可能在 -80℃ 下长期保存。对于需要长期保存的裂解液,请将新鲜制备的试管转移到可用的 -80℃ 冰箱中以防止降解。

  • 在 -20℃ 下储存时,裂解液的保质期较短;不建议在此温度下长期储存。CST 建议裂解液在 -20℃ 下储存不超过 3 个月。

  • 某些细胞系、处理和磷酸化位点对反复冻融更敏感。 应尽最大可能减少冻融次数。 其中一种方法是将较大的裂解液分装为许多小份的蛋白裂解液。然后可以在 -20℃ 下储存几个试管,而剩余的试管在 -80℃ 下保存,直到需要为止。这样可确保在样本用完前的冻融次数仅为数次,限制降解。

  • 如果您发现样本降解,则准备一批新的裂解液。 

20-CEP-79213 裂解液处理 1泳道 1 中的裂解液降解。

  • 对新鲜制备的裂解液进行超声处理通常可以释放核蛋白或膜蛋白,剪切 DNA,并使裂解液的粘度降低。在使用组织裂解液样品时,这种方法特别有用。CST 建议通过将探针完全浸入裂解液中 10-15 秒(3 遍以上),在中等或较低温度下用探针超声仪处理裂解液。  在每次超声处理之前和之后,请确保在冰上短暂冷却裂解液,并避免使裂解液起泡沫。

 


  • 一些细胞系或组织富含蛋白质,以至于它们可能产生浓度过高的裂解液。在蛋白质印迹分析中,过度浓缩的裂解液无法有很好的电泳或结果表现,因为凝胶道中的总蛋白质太多。结果会导致条纹或脏污,与下图类似。  

20-CEP-79213 裂解液处理 2泳道 2 中的过度浓缩裂解液。

  • 如果遇到浓度过高的裂解液,请在 SDS/DTT 中按 1:1 比例稀释,以将裂解液的总蛋白浓度降低一半。通常,这将在您的蛋白质印迹分析中产生较干净的条带,如下图对蛋白裂解液进行稀释后所示。  

20-CEP-79213 裂解液处理 3

无论您是刚开始实验还是已经从事多年实验,投入实验的时间、资源和精力都是宝贵的。注意这些裂解液处理指南,您将更好地准备延长您辛苦获得的裂解液的保质期。

 

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