“技术提示”视频：我该使用多少抗体来进行 ChIP？

现在可以查看 CST 技术提示播放列表中的其他视频了！在这一版本的技术提示中，我们将解决客户向我们 ChIP 团队提出的一个关于常见实验步骤的问题：染色质免疫沉淀 (ChIP) 实验需要使用多少抗体？抗体并不总是越多越好 - 观看视频，了解原因。 

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转录：

我该使用多少抗体来进行 ChIP 实验？我叫 Fang Chen，是 Cell Signaling Technology ChIP 团队的一名高级科学家，下面是 CST 技术提示。

在一次 ChIP 实验中使用的最佳抗体量根据抗体的亲和力、敏感性和特异性而有所不同。抗体并不是越多越好。

正如您在这些滴定数据中所看到的，抗体过多和过少都会减弱 ChIP 信号。对于大多数经 ChIP 验证的抗体而言，在 ChIP 实验中，0.5-2 µg 抗体能产生最佳信噪比。

在我们的内部抗体验证工作中，ChIP 团队的科学家在每次免疫沉淀中使用 10 µg 染色质进行滴定实验，以确定最佳的抗体稀释度，并随后将这些信息提供给您。

重要的是要维持抗体量与染色质量的比率，而不是抗体量与免疫沉淀体积的比率。例如，CST 建议每次免疫沉淀使用 10 µg 染色质 DNA。但如果使用了少于 10 µg 的染色质 DNA，则应按比例减少抗体量。

CST 建议每次免疫沉淀的总体积为 500 µL。如果使用等量 DNA 进行 ChIP，但免疫沉淀体积更大，则无需添加额外的抗体，但延长孵育时间可能有助于补偿稀释的反应。

对于 IgG 等对照抗体而言，您应该使用与您的检测抗体相同的量，以便进行公平比较。

谢谢观看。您可以在 cellsignal.com 上各抗体的产品页中找到所有应用的完整实验步骤。

如果您对某种抗体或实验步骤有任何疑问，您可以在 cellsignal.com/support 上联系我们的一位科学家。

切勿忘记订阅新的技术提示视频，我们下次再见。

祝您实验成功！