CST 博文: 实验室展望

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在高通量免疫测定中使用经过验证的抗体对的重要性

多年来,原始 ELISA 格式有许多添加和变化,包括酶偶联物和用于比色、化学发光或荧光测量的底物。为了简化方法和提高免疫测定的灵敏度,还开发了许多仪器。然而,即使有了新的免疫测定技术和方法,所有这些技术的基础仍然是抗体对,其特异性和灵敏度最终决定了测定性能。

抗体特异性在免疫测定中的重要性

 

抗体的特异性不仅确保我们测量的是我们想要测量的内容,而且还通过影响背景信号/噪声来提高灵敏度。如果我们考虑与表面结合的抗体,预结合信号或来自该抗体本身的信号可能非常低。一旦将样品添加到检测中,即在血浆或细胞裂解物中,就会有感兴趣的靶标加上数以千计的可能与单克隆抗体 (mAb) 结合的可能靶标。样品中发生的非特异性结合越大,分析的基线或噪音就越高。有一些统计和实验方法可以将基线保持在较低水平,但没有先天 mAb 特异性,此基线可能过高,这将限制检测的灵敏度。

 

抗体特异性提高信噪比

 

一种抗体的特异性可以与第二种抗体的特异性结合,以构建“mAb-target-mAb”夹心结构(其中一个 Ab 是捕获,一个 Ab 是检测)。尽管拥有两个 mAb 可能会使噪音增加两倍,但利大于弊。在不列出所有可能性的情况下,一般特征是通过拥有两种 mAb,您可以提高您的特异性,并且可以偶联一种或两种 mAb 以协助表面捕获或检测。

 

在任何平台上开发高质量的检测

 

使用两个配对抗体的免疫测定通常是首选,但是,总体问题是现在成功的标准高度增加了一倍以上。首先,需要努力寻找两种特定的 mAb,而不是一种。另一个问题是它们必须同时结合两个不同暴露的表位,同时还要结合到表面或结合到检测部分。必须使用大量资源、时间和金钱来寻找单独测试的 mAb,然后成对测试和验证以满足这些标准。靶标蛋白的测量是至关重要的,但如何构建获得测量的工具通常不是核心问题。您将花费大量资源来开发此工具。人们通常更喜欢拿到温度计来测量体温,而不必先制作温度计然后使用它。

 

那么,无论平台如何,您如何开始构建良好的高通量免疫分析?

从特定的、稳健的 mAb 开始。越多越好。然后在一个简单的检测中找出哪些抗体对,并确定哪些抗体对在偶联时仍然有效。古老的格言“您得到您筛选的东西”在这里适用。如果您筛选适用于 IHC 的 mAb,它也可能适用于 ELISA 格式,但专为 ELISA 应用设计的筛选将为该测定产生更好的 mAb。

 

考虑到使用抗体对的众多平台,它是否适合所有研究?在一天结束时,您将不得不在您选择的特定平台上尝试抗体对或抗体对组合。然而,无论平台如何,具有特定表位特异性的 mAb 都将检测到相同的表位。平台之间最大的差异之一是可能需要针对特定表面、珠子或检测方法偶联 mAb。如果该抗体对的早期验证的一部分涉及测试 mAb 的偶联形式,无论其结构如何,那么抗体在所选平台上也能发挥作用的可能性要高得多。

 

最重要的是,经过筛选和验证可作为抗体对工作的特异性和敏感抗体仍然是任何免疫分析中最重要的部分,无论采用何种技术。

 

CST 检测开发团队在筛选多种抗体组合时应用相同的验证标准,以找到可用于我们的 ELISA 试剂盒的最佳抗体对。您可以从这些试剂盒中获取抗体对,以满足您的 ELISA 和 HT 免疫分析需求。要提交申请 - 选择您感兴趣的 ELISA 试剂盒靶标并在此处提交查询

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