CST 博客: 实验室展望

Cell Signaling Technology (CST) 官方博客,在这里我们讨论您在实验台前工作时的期望,分享贴士、技巧和信息。

用于细胞分类和鉴定蛋白质定位的工具

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我何时要对细胞分类?为什么我在意蛋白质位于何处?这实际上是两个利用不同应用程序来回答的不同问题。

细胞分类使用特异性标记物识别异质群体中的特定细胞类型。例如,如果想了解小胶质细胞用于去除受损神经元的机制,则您将需要使用 IbaCD11bTMEM199 等标记物确保您的样本仅由小胶质细胞组成。否则,如果您的样本包含其他类型的脑细胞,您面临自身数据出现偏差的风险。类似地,如果您正使用干细胞探索分化l路径,则您会需要定期核查您的样本,以通过寻找干细胞标志物(如 SoxOct4Nanog)的表达确保样本尚未意外分化。细胞分类可确保您不会用错误鉴定或交叉污染的细胞进行实验。

 

如何对混合样品中的细胞分类?流式细胞术非常适合这种应用,因为它可以提供单个细胞层面的数据。细胞可以利用胞内驻留或细胞表面驻留的标志物行分类。这些标志物可以用于独立着染细胞或用于多重检测的检验组合中;但是,您将须了解抗体偶联物与不同样品制备方法的兼容性。要进行多重检测,只需使用与不同荧光团偶联的细胞目的标记物特异性一抗。然后可以对染色的活细胞使用荧光激活细胞分选法 (FAC),以根据标志物谱分选细胞群体,从而分离出纯化的同质细胞群供进一步实验。

 

另一方面,蛋白质定位可以告诉您在给定时间某蛋白质定位于细胞或组织中何处。对于激活时转移到胞核的蛋白质如 STAT 家族,知道蛋白质定位何处可以告诉你在某些条件下蛋白质有活性,还是无活性。免疫荧光 (IF) 和免疫组织化学 (IHC) 是最常用于这类实验的应用,因为您可以确切地看到您的目的蛋白定位于哪个亚细胞区室。区室特异性抗体或染料可以结合针对您关注的特定蛋白质的抗体用,从而允许您确切了解您关注的蛋白质在给定时间常驻细胞中何处。

如果您需要在确定蛋白定位之前对细胞分类,原因在于根据细胞类型,目的蛋白可能存在于不同亚细胞区室中,则怎么办?如果您发现自己面临于这种情况,一种方案是处理您的细胞,使用适当的标记物通过流式细胞术/FAC 收集一个特定细胞类型,然后用您的 IHC/IF 实验追踪之,以了解目的蛋白定位于目标细胞群中何处。查看我们的人免疫细胞标记物指南小鼠免疫细胞标记物指南神经元和胶质细胞标记物通路干细胞和谱系标记物指南,并开始对您的细胞进行分类!

Andrea Tu 博士
Andrea Tu, PhD
Andrea Tu 博士是痴迷于了解最新科学趋势和发展的 Kallidus Group 科学营销部经理。她取得加州大学伯克利分校分子生物学与细胞生物学博士学位,在那里,她研究了 TGF-β 信号转导通路中的 Smad 翻译后修饰。20 年来,Andrea 先后在加州大学圣地亚哥分校、索尔克研究所、斯坦福大学、安捷伦科技公司和 Bio-Techne 从事研发、销售支持和营销等技术岗位。

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