CST 博客: 实验室展望

Cell Signaling Technology® (CST) 官方博客,在这里我们讨论您在实验台前工作时的期望,分享贴士、技巧和信息。

所有帖子

用于细胞分类和鉴定蛋白质定位的工具

我何时要对细胞分类?为什么我在意蛋白质位于何处?这实际上是两个利用不同应用程序来回答的不同问题。

细胞分类使用特异性标记物识别异质群体中的特定细胞类型。例如,如果想了解小胶质细胞用于去除受损神经元的机制,则您将需要使用 IbaCD11bTMEM199 等标记物确保您的样本仅由小胶质细胞组成。否则,如果您的样本包含其他类型的脑细胞,您面临自身数据出现偏差的风险。类似地,如果您正使用干细胞探索分化l路径,则您会需要定期核查您的样本,以通过寻找干细胞标志物(如 SoxOct4Nanog)的表达确保样本尚未意外分化。细胞分类可确保您不会用错误鉴定或交叉污染的细胞进行实验。

 

如何对混合样本中的细胞分类? 流式细胞术非常适合这种应用,因为它提供单细胞水平的数据。可以使用常驻胞内或细胞表面的标记物对细胞分类。这些标记物可用于独立地着染细胞,或用于多重标记物组中;然而,您将须了解抗体偶联物与不同样品制备方法的兼容性。要进行多重检测,仅使用对目标细胞标记物特异的与不同荧光团偶联的一抗即可。然后可以对染色的活细胞使用荧光激活细胞分选 (FAC) 法,以根据标记物谱分选细胞群,分离纯化的同质细胞群供进一步实验。查看我们的人类免疫细胞标志物指南小鼠免疫细胞标志物指南神经元标志物和神经胶质细胞标志物途径 干细胞和谱系标志物指南 ,开始对您的细胞分类!

 

另一方面,蛋白质定位可以告诉您在给定时间某蛋白质定位于细胞或组织中何处。对于激活时转移到胞核的蛋白质如 STAT 家族,知道蛋白质定位何处可以告诉你在某些条件下蛋白质有活性,还是无活性。免疫荧光 (IF) 和免疫组织化学 (IHC) 是最常用于这类实验的应用,因为您可以确切地看到您的目的蛋白定位于哪个亚细胞区室。区室特异性抗体或染料可以结合针对您关注的特定蛋白质的抗体用,从而允许您确切了解您关注的蛋白质在给定时间常驻细胞中何处。

 

因为根据细胞类型,您的目的蛋白可能存在于不同的亚细胞区室中,故如果在确定蛋白定位之前您需要对细胞分类,要做什么? 如果您发现自己面临这种情况,一种方法要处理您的细胞,使用适当的标记物通过流式细胞术/FAC 收集特定的细胞类型,然后通过您的 IHC/IF 实验来了解标蛋白质定位于目标细胞群中何处。

相关帖子

多发性骨髓瘤的治疗方法

何谓多发性骨髓瘤?多发性骨髓瘤是一种可治疗但不可治愈的浆细胞癌……
Andrea T 2022 年 7 月 02 日 17:16:45

低氧及其在代谢中的作用

低氧,定义为生物环境下氧不足,导致细胞应激并改变......
Chris S 2022 年 6 月 08 日 03:00:00

一切在于亲和力

2012 年,Roux 等人在 Journal of Cell Biology 上发表了一项开创性方法,用于鉴定......的相互作用物
Charles F 2022 年 5 月 25 日 03:00:00
Powered by Translations.com GlobalLink OneLink SoftwarePowered By OneLink