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明确蛋白质状态的工具

翻译后修饰 (PTM) 是一种关键的调节机制,可让细胞严格控制蛋白质功能。它们是可逆性共价修饰,这些修饰改变蛋白质状态,例如蛋白质折叠、蛋白质-蛋白质相互作用、蛋白质-DNA 相互作用、蛋白质寿命、蛋白质定位和受体激活。这些行为转而控制多个生物过程,如酶活性、细胞周期、细胞凋亡和基因表达。

一些常见的翻译后修饰包括磷酸化、乙酰化和甲基化。一个蛋白质可以在几个不同的氨基酸上发生不同修饰,而不同的 PTM 组合会导致不同的蛋白质行为。例如,p53 发生多达 50 种独立的翻译后修饰。p53 上Ser15 和 Ser20 的磷酸化可以阻断与 MDM2 相互作用以促进 p53 响应于 DNA 损伤而积累和激活;Ser46 的磷酸化在诱导细胞凋亡中发挥作用;Lys164 的乙酰化诱导细胞周期停滞;Lys373 的乙酰化导致 p53 N 端残基过度磷酸化,这转而增强 DNA 与促凋亡基因启动子的结合能力。

 

对其他蛋白质(如组蛋白)的 PTM 也类似地复杂。例如,组蛋白 3 上 Lys9 的乙酰化在组蛋白配置和染色质组装中起主导作用,而 Ser10、Ser28 和 Thr 11 的磷酸化与有丝分裂和减数分裂期间的染色体浓集密切相关。组蛋白 3 甲基化转而主要与转录激活有关。然而,存在组蛋白 3 甲基化与抑制有关的场景。这只不过是蛋白质 PTM 所涉及的复杂性一瞥。

 

扰乱调节蛋白质 PTM 状态的机制具有严重后果,并且在癌症、心血管疾病和神经退行性疾病等多种疾病中发现这种扰乱。然而,涉及了解修饰蛋白质的多种不同方式以及这些修饰的含义时,我们只不过才开始触及皮毛。

 

那么,您如何开始监测样品中蛋白质的状态呢? 蛋白质印迹特别有用,因为您可以使用针对总蛋白质和针对特定残基上目标修饰的高度特异性抗体。 没有时间找到理想的配对使用? CST 已经确定可供您即刻开始使用的二重体配对。 细胞可以用调节剂处理或在特定条件下培养,以诱导特定的细胞状态。 然后,特异性 PTM 抗体可以与未处理的对照相比,确定存在的修饰蛋白质的量,以及与蛋白质总量相比,确定存在的修饰蛋白质的量。 这可能提供非常多的信息,但仅仅您的 PTM 特异性抗体不与同一蛋白质上的其他 PTM 发生交叉反应时才如此。 此外,PTM 特异性抗体需要灵敏到甚至足以检出低水平的修饰蛋白。

 

蛋白质印迹法也非常灵活,因此在设计实验时您将有数个选择。想要进行多路复用以节省时间或样品?使用在不同物种中产生的一抗和荧光偶联二抗对。或者,如果想再次分析您的印迹膜,您也可以洗脱并再次检测。想要放大您的信号?一种选择是使用生物素化一抗、生物素化二抗和链霉亲和素-HRP,将更多过氧化物酶分子定位到蛋白质迁移之处。需要免疫沉淀您的目的蛋白?请使用与 Sepharose® Beads 偶联的一抗。或者使用您青睐的抗体和蛋白 A/G 琼脂糖或磁珠来免疫沉淀您的目的蛋白。涉及选择使用哪种化学发光底物时,您甚至有众多选择,这取决于您是否想要使信号或信噪比最大化。

 

Cell Signaling Technology® 是一家由像您一样的科学家组成的公司,因此我们知道您在蛋白质印迹试剂中寻觅的是什么。此外,我们所有的抗体都已针对特定应用j进行i验证,并具有特异性、灵敏度、可重复性——因此您可以专注于您的研究!

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