您是否一直想知道如何监测细胞状态或细胞应答?从基础研究角度看,信号转导通路如此错综复杂,以至于细胞读出是例如特定蛋白质受到修改或表观遗传事件发生时,充分了解结果的必要条件。在当今出版界,知道某蛋白质暴露于已知刺激时磷酸化并不足矣;您还必须知道磷酸化事件对细胞群体行为的影响。从转化医学的角度看,了解细胞群体如何响应于潜在处理至关重要。这可能包括但不限于针对神经退行性疾病研究细胞凋亡、针对肿瘤疾病研究衰老以及研究针对病毒感染的免疫应答。
可以通过测量与您感兴趣的过程相关的关键标记或读数来监控细胞状态。一个特定的过程可以有多个读数,可用于不同的方法。这使您能够测量多个关键标记以防止误报,并让您可以灵活地选择最适合您的实验的标记、应用和检测方法。
例如,有多种方法可以通过靶向细胞死亡和信号转导通路的不同标志来监测细胞凋亡。末端脱氧核苷酸转移酶 dUTP 缺口末端标记 (TUNEL) 是一种染色剂,可检测在晚期细胞凋亡中观察到的片段化 DNA。广泛应用于流式细胞术、免疫组织化学或荧光显微镜检测凋亡细胞。同样,当 PS 在质膜内翻转并出现在细胞表面时,膜联蛋白 V 与磷脂酰丝氨酸 (PS) 结合通常与流式细胞术一起使用,以监测早期细胞凋亡。最后,caspase-3 激活可与蛋白质印迹、免疫组织化学或荧光显微镜一起使用,以监测 caspase 诱导的凋亡。
衰老也可以以几种不同的方式进行监测。一种常见的方法是测定 β-半乳糖苷酶活性的增加,这是衰老的标志。酶活性可以使用流式细胞术或基于平板的测定法通过荧光定量测量,或使用染色试剂盒成像。还可以通过使用蛋白质印迹法、免疫沉淀法、免疫组织化学法、免疫荧光法或流式细胞术检测表达衰老标记物(如 p16 INK4A、p21 Waf1/Cip1 和 Lamin B1)来监测细胞衰老。
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