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介绍通用 CAR 检测试剂:抗 CAR 接头 mAb

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介绍通用 CAR 检测试剂:抗 CAR 接头 mAb

嵌合抗原受体 (CAR) T 细胞疗法是一种革命性且快速演进的过继细胞免疫疗法,在利用身体自身免疫系统指导抗肿瘤应答方面显示出巨大前景。随着新 CAR-T 疗法的开发,用于表征表面表达 CAR 的检测试剂将对验证和优化新治疗方案至关重要。 

然而,由于新 CAR 针对新肿瘤抗原设计,因此必须为每次迭代开发和验证独特的检测试剂,以确信 CAR 表面表达。这个过程不仅昂贵且耗时,而且伴随非特异性检测的问题可能导致进一步延迟。

但是,如果有一种通用检测试剂可以识别和确认您的 CAR 存在,而不管其抗原特异性,则情况如何?在 Cell Signaling Technology (CST),我们开发了一组旨在识别广泛 CAR的检测试剂:抗 CAR 接头抗体。 

这些首次上市的试剂可以整合到多参数流式检测组合中,用于监测临床前模型中 CAR 的表达、转运和持久性,以及在临床制造过程期间监测 CAR 表面表达。

检测 T 细胞上 CAR 表面表达的现有方法

要了解这种新颖的 CAR 检测技术如何工作,让我们首先探索 CAR-T 细胞的结构和功能。 

CAR 是旨在调节 T 细胞应答并将其重定向至自身起源性肿瘤抗原的工程化受体。顾名思义,该受体是一种可分解为四个主要组分的嵌合蛋白:胞外靶抗原结合结构域(例如,单链可变片段或 scFv)、间隔区或铰链结构域、跨膜结构域和至少一个胞内信号转导结构域(图 1)。这些元件的成功组合使 CAR-T 细胞重新定向以辨识选定的抗原并杀伤肿瘤细胞1

显示接头结构域的 CAR 结构图 1:详述抗原导引向结构域和接头序列的 CAR 结构。 

在发现和临床前研究期间设计 CAR-T 细胞时,科学家需要通过监测 CAR 表面表达部分地验证细胞有功能。

大多数现有检测方法依赖结合于 CAR 细胞外结构域并利用 scFv 或铰链区可变重结构域或可变轻结构域内部特定序列的试剂。

根据所用 CAR-T 检测试剂的类别,可提供的解决方案往往缺乏特异性,可能不易整合到流式检测组合中,或者仅用于检测单一 CAR。 

经验证的通用抗接头 CAR 检测试剂:它们如何发挥作用?

新的 CST 抗 CAR 接头抗体不靶向可变重结构域和可变轻结构域或铰链区内部的序列,而靶向 scFv 可变重结构域和可变轻结构域之间的接头序列。由于大多数基于 scFv 的 CAR 包含重复性甘氨酸-丝氨酸接头序列(G4S 接头)或 Whitlow 接头序列2,所以抗 G4S mAb 和抗 Whitlow mAb 可用于使用流式细胞术监测几乎任何基于 scFv 的 CAR 的表面表达(图 2)。

CST 抗 CAR 接头抗体接合至 G4S 接头或 Whitlow 接头

图 2:CST 抗 CAR 接头抗体识别 G4S 接头序列或 Whitlow 接头序列。 

这适用于任何含有这些接头序列的 CAR ,包括靶向 CD19 抗原和 CD20 抗原的那些 CAR,这两种抗原是 B 细胞恶性肿瘤中高度表达的细胞表面分子。

这些抗体已利用我们的抗体验证原则标志严格加以验证,并已在相关模型系统上受到测试,包括表达针对不同肿瘤抗原的 CAR 的人原代 T 细胞。抗体可按三种偶联物提供:藻红蛋白 (PE)、Alexa Fluor® 644 和 Alexa Fluor ® 488,也可以使用我们的定制偶联服务定制偶联。

结果就是一种经验证的通用 CAR 检测试剂,它可以通过消除不必要且耗时的步骤,加快您的发现研究或药物开发过程。

CAR-T 疗法的快速发现和开发

长期以来,使用身体自身免疫系统作为抗癌疗法一直是癌症研究人员的梦想 - 一个已经用 CAR-T 疗法实现的梦想。已证明采用 CAR-T 疗法的治疗药(称为“活药物”)在单次输注后有效几十载。    

这些治疗血液系统恶性肿瘤的革命性疗法取得成功为开发新疗法铺平了道路,尤其对实体瘤和衰老疾病,如纤维化肝病和糖尿病是这样3-5。随着这种前景良好的治疗一直走在免疫疗法的最前沿,对于选项有限且患有难治疗癌症的患者,目前正在开发的新疗法无疑将力挽狂澜。 

了解更多: 

 

选择参考文献:

  1. Labanieh L, Majzner RG, Mackall CL. Programming CAR-T cells to kill cancer. Nat Biomed Eng. 2018;2(6):377-391. doi:10.1038/s41551-018-0235-9
  2. Whitlow M, Bell BA, Feng SL, et al. An improved linker for single-chain Fv with reduced aggregation and enhanced proteolytic stability. Protein Eng. 1993;6(8):989-995. doi:10.1093/protein/6.8.989
  3. Mohanty R, Chowdhury CR, Arega S, Sen P, Ganguly P, Ganguly N. CAR T cell therapy: A new era for cancer treatment (Review). Oncol Rep。2019;42(6):2183-2195. doi:10.3892/or.2019.7335
  4. Li JH, Chen YY. A Fresh Approach to Targeting Aging Cells: CAR-T Cells Enhance Senolytic Specificity. Cell. 2020;27(2):192-194. doi:10.1016/j.stem.2020.07.010
  5. Tenspolde, M., Zimmermann, K., Weber, L. C., Hapke, M., Lieber, M., Dywicki, J., Frenzel, A., Hust, M., Galla, M., Buitrago-Molina, L. E., Manns, M. P., Jaeckel, E., & Hardtke-Wolenski, M. (2019). Regulatory T cells engineered with a novel insulin-specific chimeric antigen receptor as a candidate immunotherapy for type 1 diabetes. Journal of Autoimmun. 2019;103:102289. doi:10.1016/j.jaut.2019.05.017
Amrik Singh 博士
Amrik Singh, PhD
Amrik Singh 是 Cell Signaling Technology 的免疫学研究员。他是一名生物化学家,在波士顿大学医学中心和贝丝以色列女执事医学中心接受过培训。在 CST,他正在帮助开发和管理过继细胞治疗产品组合,特别关注开发抗体和检测来表征 CAR-T 细胞。

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