你准备好转移你的蛋白了吗？湿转移与半干转移

您很兴奋地进行一次蛋白印迹实验来检测“您最喜欢的蛋白”。裂解物已制备好，并且已通过 SDS-PAGE 分离出蛋白。现在，是时候将蛋白从凝胶转移到膜上了，你坐下来想 — 用湿转移，还是半干转移呢？？或者，作为一名研究生，你比我那时候准备得更好，并且你已经知道了你的下一个步骤，在这种情况下，你很清楚湿转移和半干转移的优缺点。

哪一种方法是最好的？用于蛋白质印迹法的湿转移与半干转移

根据常规实验室知识，湿转移（水槽）方法能更好地从凝胶上转移成为印迹，但半干技术则更快，消耗的缓冲液也少得多，更别说它还是一个干净的流程了，这很适合我们中比较挑剔的人。膜要干燥，因此湿转移不太容易失败，尤其建议用于大蛋白。在半干转移中，夹心结构直接放在正电极和负电极之间。在湿转移中，夹心结构放在正电极和负电极之间，并浸泡在应用了电场的转移缓冲液中。

• 半干转移： 纸 > 凝胶 > 膜 > 纸（均用转移缓冲液浸湿）
• 湿转移： 海绵 > 纸 > 凝胶 > 膜 > 纸 > 海绵

把较大的蛋白从凝胶转移到膜的速度较慢，因此你可以根据你的目的蛋白大小来考虑延长转移时间。如果这样做，我们建议用转移缓冲液将甲醇的浓度降低至 5-10%。 

在很大程度上，决定使用湿转移还是半干转移与使用的膜的类型有关。虽然许多人认为硝化纤维和 PVDF 可以在很大程度上互换，但需要记住仍然存在一些差异。PVDF 通过疏水相互作用结合蛋白，而硝化纤维则同时通过疏水和静电相互作用结合蛋白。孔径是影响转移条件的另外一个重要因素，两种膜都可用于各种孔径来满足用户需求。一些厂家建议，在封闭前先将膜风干，然后用甲醇再次浸湿，以增强与转移蛋白的结合，并降低背景。这个脱水步骤可以去除变性蛋白与膜之间的水分。如有必要，在特殊和困难情况下需要用多聚甲醛（Preterre 等）固定膜，以提高蛋白存留率。 

因此，对于必须要求绝对最高转移水平的人来说，湿转移到硝化纤维上可能是最好的办法。但就速度和易用性而言，半干转移通常更能接近一般用途标准，即使在进行一些微调后。对于我们多数人来说，归根结底是我们实验室的哪台装置可以用，以及优化主要目的蛋白的转移条件。

好了，希望在你凝神斟酌是使用湿转移还是半干转移时，你的蛋白没有从凝胶上流出！

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