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我可以在流式细胞术实验中联用哪些荧光团?

流式细胞术提供令人兴奋的能力来检测和量化每个细胞的多种读数,从而使您能够多维度洞悉您的目标系统。联用与不同荧光分子或荧光团偶联的多种抗体是一种常见方法。但是哪些荧光团会彼此差异明显并且易于区分?哪种会导致荧光高度重叠和数据无法解释?当您新接触流式细胞术或正在使用不熟悉的荧光团操作时,了解哪些荧光团可以一起使用可能颇费时间。我们开发了一套易于使用的资源来帮助您快速选择兼容性荧光团。

确定两个或多个荧光团是否可以联合使用的可靠方法是在光谱查看器上查看它们的激光谱和发射光谱。查看它们的光谱将使您能够了解这些荧光团是否会为相同颜色的光所激发,以及它们发射的光会多大程度重叠。重叠越少越好,因为重叠性光将需要补偿,以在数学上消除来自目的荧光团以外荧光团的光的作用。当您的检测仅由几个读数组成时,可以选择一组几乎不需要补偿的荧光团。这将节省大量的设置时间!它还将降低所得数据的不确定性层级。

 

小型流式细胞术成套检测兼容荧光团快速指南

 

如果您正在构建一种大型抗体成套检测并需要查看许多荧光团的重叠,则使用光谱查看器(尤其联用成套检测构建器)非常有帮助。但是,如果您有单一荧光团并且只想知道可以用什么与它配对呢?当您只需要一个简单的是或否答案来评估您的选项时,加载所有不同的光谱可能颇费时间。为了帮助您更快找到这个答案,我们已生成一张快速参考表(如下),向您展示可以联用哪些常用的荧光团,同时需要很少或不需要补偿。该表还展示不应联用哪些荧光团,因为它们会产生高度重叠性荧光信号,这些信号只能用光谱流式细胞仪区分(有时不确定性大)。

 

提供了两张表格,一张用于流式细胞仪中所用每种类型的光路。平行激发意指每个激发源独立撞击靶标,并独立测量所得的荧光发射。或者,在共线激发中,激发源都汇聚在目标上,并且将所得的发射光谱一起量化。因此,激发源不同但发射光谱高度重叠的两种染料可以在具有平行激发的仪器上一起使用,但它们不能在具有共线激发的仪器上加以区分。使用与您将使用的流式细胞仪的光路相对应的表格。

 

适用于细胞术新手的流式细胞术兼容性表

21-CAN-41050 博客 平行激发流式细胞仪 121-CAN-41050 博客 共线激发流式细胞仪 2

想知道随不同方案推荐多种抗体时,如何在您的检测中联用这些抗体吗? 请查看我们的流式细胞术抗体染色指南

以确定如何最佳联用结合胞外靶标和胞内靶标的抗体。

 

我们希望这有帮助。如果您对荧光团或使用我公司抗体进行流式细胞检测有任何疑问,请联系我们的团队

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