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揭示 G3BP 在细胞能量学调节中的作用

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在 Prentzell 等人发表于《细胞》杂志的一篇文章中,科学家们使用了大约 30 种不同的 CST 抗体来表征 Ras GTPase 激活蛋白结合蛋白 G3BP1 和 G3BP2。这些蛋白被广泛用作应激颗粒 (SG) 的标记物应激颗粒是在不利环境条件下形成的细胞浆 mRNA-蛋白质复合体,其作用在于通过减少蛋白质合成来促进细胞存活。

61559_G3BP1 抗体缩略图

探索 CST 的相关抗体和小包装组合:

G3BP1 (E9G1M) XP® Rabbit mAb #61559
G3BP2 (F3Y7Z) Mouse mAb #86863
mTOR Pathway Antibody Sampler Kit #9964
Stress Granule Marker IF Antibody Sampler Kit #29530

 

根据这项研究的结果,目前已知 G3BP 将结节性硬化复合体 (TSC) 与溶酶体连接在一起,并通过雷帕霉素靶蛋白复合体 1 (mTORC1)的靶标 来抑制信号转导。这一发现的意义重大,因为 mTORC1 过度活化与典型特征为细胞过度生长、迁移和神经元兴奋性的疾病有关。因此 G3BP 可能是癌症和神经元疾病的重要治疗靶标。

因为所有 CST 抗体都根据抗体验证标志™ 进行了严格验证,研究人员能够有效地获得明确的结果。这些包括确认 G3BP 和 TSC 复合物之间的物理相互作用,以及对 mTORC1 信号转导的彻底调查。

 

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G3BP1 可抑制无应激颗粒细胞中的 mTORC1

虽然已知 SG 可抑制 mTORC1,但 G3BP1 是否参与此过程至今尚不明确。为了解决这个问题,在经亚砷酸盐处理以诱导 SG 的 MCF-7 细胞与在与 SG 形成无关的条件下培养的细胞之间,比较了 mTORC1 活性。

正如预期的那样,亚砷酸盐增强了 mTORC1 底物核糖体蛋白 S6 激酶 B1 (RPS6KB1) 在 T389 (RPS6KB1-pT389) 处的磷酸化。然而,亚砷酸盐处理对 G3BP1 敲低型细胞中的 RPS6KB1-pT389 水平无影响,表明 G3BP1 不影响含 SG 的细胞中的 mTORC1 活性。

结合其他数据,这些结果证实 G3BP1 在无 SG 的情况下抑制 mTORC1,表明 G3BP1 除了作为核心 SG 组分之外还起到额外的作用。

G3BP 位于溶酶体表面

一系列研究表明,虽然 G3BP2 可在 SG 组装中替代 G3BP1,但不能弥补 G3BP1 的缺失;G3BP2 在 G3BP1 敲除型细胞中不会抑制 RPS6KB1-T389 过度磷酸化。根据这一发现,得出了 G3BP 可形成一种杂合物的结论,因此需要进一步研究以确定这些蛋白在哪些亚细胞区室抑制 mTORC1。

研究表明,G3BP1 和 G3BP2 与 TSC 复合体(由 TSC1TSC2 和 TBC1D7 组成)位于相同的组分中,即溶酶体组分。对这些组分的探究表明,G3BP 位于与蛋白溶酶体相关膜蛋白 1 (LAMP1) 非常接近的位置。尽管 LAMP1(主要为管腔蛋白)在使用溶酶体制剂进行胰蛋白酶处理后保持完整,但 G3BP 和 TSC 复合体发生了分解,表明 G3BP 与 TSC 复合体同位于溶酶体表面。

免疫共沉淀 (co-IP) 研究和邻位连接技术 (PLA) 随后证明了 G3BP 与 TSC 复合体之间存在物理相互作用。重要的是,这项工作表明 G3BP1 敲除型细胞的表型类似于显示出 TSC2 缺失的细胞,即在饥饿时,mTOR 增大,且显示出在溶酶体上的位置增强。

G3BP1 通过 TSC 复合体抑制 mTORC1

通过在有或无 TSC2 的情况下分析 G3BP1 抑制对 mTORC1 活性的影响,作者研究了 G3BP1 与 TSC 复合体之间的相互作用。虽然 G3BP1 抑制在对照细胞中诱导了 RPS6KB1-pT389,但在 TSC2 敲除(TSC 复合体缺失)细胞中未观察到相似的结果。这些结果表明 G3BP1 和 TSC 复合体在同一通路中抑制 mTORC1,其中 TSC 复合体依靠 G3BP1 与溶酶体连接在一起。

 

mTOR 信号转导通路_缩略图

探索交互式 mTOR 信号转导通路图以及相关的 CST 产品。 

靶向 G3BP1 以进行治疗干预

G3BP1 对于表现为 mTORC1 过度活化的疾病具有显著的治疗潜力。在发表文章中指出,当 G3BP1 mRNA 或蛋白水平低于中位值时,乳腺癌患者的无复发生存期 (RFS) 较短,这一发现与 TSC1 或 TSC2 较低患者中的 RFS 较短一致。因此,利用 G3BP1 可使患者的生存率升高,例如通过预防转移或减缓肿瘤生长。

此外,据发表文章报告,核糖体蛋白 s6 在丝氨酸 235/236 位点的磷酸化 (Rps6-pS235/236) 证明,抑制斑马鱼 G3BP1 可使 mTORC1 活性增强。当体内发生这种抑制时,它会对 TSC2 缺失对脑功能的 mTORC1 依赖性影响进行表型模拟,这强调了 G3BP1 在神经系统发育和活性中的关键作用。这也凸显了 G3BP 在治疗神经系统疾病中的潜在效用。

CST 抗体产品列表

浏览下面的产品列表,查看研究论文中使用了哪些抗体。

CST 产品 应用 反应性
Calreticulin (D3E6) XP® Rabbit mAb #12238 WB、IF、F H, M, R
Calnexin (C5C9) Rabbit mAb #2679 WB、IHC、IF H、Mk
Cathepsin D Antibody #2284 WB H、Mk
EEA1 (C45B10) Rabbit mAb #3288 WB、IP、IF H, M, R
eIF2α Antibody #9722 WB H、M、R、Mk
Phospho-eIF2α (Ser51) Antibody #9721 WB H, M, R, Mk, Dm
eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAb #3411 WB、IP、IHC、IF H、M、R、Mk
Golgin-97 (D8P2K) Rabbit mAb #13192 WB、IP、IF H, M
GM130 (D6B1) XP® Rabbit mAb #12480 WB、IP、IF H、Mk
HSP60 (D6F1) XP® Rabbit mAb #12165 WB, IHC, IF, F H、M、R、Hm、Mk、X、Z、B、Pg
HSP90 (C45G5) Rabbit mAb #4877 WB, IHC, IF, F H、M、R、Mk
Lamin A/C Antibody #2032 WB、IHC H, M, R
LAMP1 (D2D11) XP® Rabbit mAb #9091 WB、IP、IHC、IF、F H、Mk
LAMP2 (D5C2P) Rabbit mAb #49067 WB H
mTOR (7C10) Rabbit mAb #2983 WB、IP、IHC、IF、F H、M、R、Mk
Myc-Tag (9B11) Mouse mAb #2276 WB、IP、IHC、IF、F、ChIP 全部
p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAb #2708 WB H
Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) (1A5) Mouse mAb #9206 WB H, M, R, Mk, Dm
Phospho-p70 S6 Kinase (Thr389) Antibody #9205 WB H、M、R、Mk
Rab5 (C8B1) Rabbit mAb #3547 WB、IF H、M、R、Mk
Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb #9367 WB、IP、IF H、M、R、Mk
Raptor (24C12) Rabbit mAb #2280 WB, IP H、M、R、Mk
S6 Ribosomal Protein (54D2) Mouse mAb #2317 WB, IHC, IF, F H、M、R、Mk、Dm
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (2F9) Rabbit mAb #4856 WB、IF、F H、M、R、Mk
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) Antibody #2211 WB、IP、IHC、IF、F H、M、R、Mk、Sc
Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb #4858 WB, IHC, IF, F H, M, R, Mk, Mi, Sc
Hamartin/TSC1 (D43E2) Rabbit mAb #6935 WB, IP H, M, R
Tuberin/TSC2 (D93F12) XP® Rabbit mAb #4308 WB、IP、IF、F H, M, R, Hm, Mk
VDAC (D73D12) Rabbit mAb #4661 WB、IHC H、M、R、Mk

 

如需了解更多有关如何使用 CST 抗体研究 G3BP 的信息,并揭示如何靶向这些必需蛋白以治疗癌症和神经元疾病,请在此处阅读全文。

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