树立行业标杆：CST 通过 YCharOS 践行抗体验证承诺

在生物医学研究的复杂领域中，抗体作为科学发现的关键工具，对于理解细胞过程、疾病机制及潜在治疗干预至关重要。然而令人遗憾的是，抗体试剂的可靠性问题长期困扰着科研界。作为 CST 的科学家，我深切了解研究人员在筛选和验证高质量抗体时面临的挑战。正因如此，25 年来我们始终坚守承诺，只为科学研究与发现提供最高品质的试剂。我们自豪地树立着产品性能的行业标杆标准。

这一承诺的重要体现，便是与抗体开放科学表征组织（YCharOS，发音同“Icarus”）这类机构的合作。这家加拿大公益开放科学公司致力于为每种人类蛋白质开展独立抗体表征研究。当前市场上有近 350 家全球供应商提供的超过 770 万种研究抗体产品（数据来源：CiteAb），YCharOS 的这项开创性工作，为抗体验证这一长期难题提供了变革性解决方案。作为在 CST 的职责之一，我通过提供抗体、数据及科学专业知识，与 YCharOS 研究人员共同评估实验结果，确保产品卓越性。

YCharOS 独特的抗体表征方法势必将重塑科研界对抗体验证的认知。本文将通过剖析 YCharOS 的研究方法，阐述 CST 对这一科研倡议重要性的专业见解。

科学可重复性：关键挑战的起源

十余年来，研究可重复性始终是科研界面临的关键难题，而验证不足的抗体已成为其中的关键诱因。一项大规模研究以触目惊心的数据揭示了这一问题的严重性——约 50% 的市售抗体在不同应用中无法保持稳定的特异性。^1,2 尽管抗体验证对研究可靠性至关重要，但复杂的验证流程常使研究人员力不从心，导致验证程序执行不充分。^2,3,4

博客： 您是否信任您的研究抗体？

这一困局的主要原因在于抗体验证方法学始终存在争议。2016 年，由多研究领域国际科学家组成的抗体验证国际工作组（临时委员会）挺身而出应对这一挑战。该组织汇聚了 Aled Edwards、David Rimm 等知名学者，不仅提出了验证流程指南，更建议应通过抗体非依赖性定量（即正交验证）或遗传学方法进行交叉验证。^5,8 其中，利用基因敲除 (KO) 策略的遗传学对照因其能特异性消除靶标蛋白基因表达，成为验证抗体特异性的补充手段并日益受到重视。但这些策略的广泛应用受限于两大现实阻碍：多数蛋白缺乏现成的 KO 细胞系或动物模型，且构建过程耗时耗资巨大。⁸

为破解这些难题，Aled Edwards、Peter McPherson、Carl Laflamme 等学者共同创立了第三方独立验证平台 YCharOS，专注于商业化单克隆抗体与重组抗体的验证。该机构以独特模式运作：保持非营利性质、拒绝投资者介入、放弃知识产权/专利申请，并承诺将所有数据无条件纳入公共领域。^6,7,8

YCharOS 平台方法论：协作透明的方法

YCharOS 平台以其独特的协作性在业内独树一帜，成功汇聚了学术研究人员与包括知名抗体制造商在内的行业伙伴。其核心方法论基于两大支柱：

1. 采用无偏转录组数据库确保阳性对照细胞系表达靶标蛋白的内源水平
2. 使用基因敲除 (KO) 细胞系作为同源对照。^8,9

该计划对抗体性能的评估涵盖三大关键应用：蛋白质印迹 (WB)（图 1A、D）、免疫沉淀 (IP)（图 1B、E）以及免疫荧光 (IF) 检测（图 1C、F）。通过这种系统设计，研究者可借助野生型和基因敲除对照，对不同供应商的多种抗体针对同一靶标蛋白的表现进行直接比较^8,9（图 1 A-F）。

图1A、B、C：经授权改编自 Ayoubi 等, Elife, 2023. 图1 D、E、F 来源：Riham Ayoubi 等，2024 年 4 月。采用 CC by 4.0 许可协议发布。

图 1. 抗体表征数据：(A,D) 蛋白质印迹法；(B,E) 免疫沉淀后结合 WB 分析，比较 IP 富集物与初始材料 (SM) 及未结合组分 (UB)；(C,F) 野生型 (WT) 与基因敲除 KO 细胞系嵌合体的免疫荧光 (IF) 检测。

重要的是，CST 主动将 YCharOS 提供的 WB KO 抗体表征数据展示于产品官网，以作为辅助验证数据，帮助科学家选择最符合其研究需求的产品。

如下图所示，您可在 CST 产品目录 Rab3A (D7B10) Rabbit mAb #12214 网页查阅相关数据范例： 

图 2. CST 的 Rab3A (D7B10) Rabbit mAb #12214 产品网页展示的 YCharOS 数据。

YCharOS 平台的主要优势

• 综合性验证策略： 该平台利用遗传学策略，与传统正交验证方法形成优势互补。基因敲除 (KO) 细胞系的应用，可帮助研究人员进一步表征/区分特异性与非特异性抗体结合。 
• 规模化与可及性： YCharOS 平台最具吸引力的特质在于其普适性——实验步骤设计最大限度地降低了技术门槛。截至 2024 年 3 月，平台已完成 96 种人类蛋白靶标的 859 种抗体测试，充分证明了其规模化能力。⁹ 据估算，该计划有望覆盖 80% 的商业化重组抗体与单克隆抗体。⁹
• 开放数据发布： 透明度是 YCharOS 方法的基石。所有表征数据均通过 ZENODO 平台开放获取，并附有数字对象标识符 (DOI)。这种对开放科学的坚持，使全球研究人员都能获取详实的抗体性能数据，从而有助于更明智地选择试剂。⁹

目前，YCharOS 正积极拓展其表征平台的应用范围，计划纳入免疫组织化学等重要技术。 

“在免疫组织化学这一 YCharOS 尚未覆盖的应用领域，CST 建立了严格的抗体验证流程，”YCharOS 运营总监 Riham 表示，“当我们拓展这一关键应用的抗体表征工作时，CST 杰出科学家提供的实践培训令我们获益良多。” 

尽管成效显著，YCharOS 仍清醒认识到其局限性。虽然在 WB、IP 和 IF 等标准流程取得显著成效，但单一实验步骤仍存在局限——缓冲液、封闭试剂、抗体稀释度等细节的差异都可能影响抗体表现。此外，当数据解读不明确且需要特定蛋白靶标知识时，现有报告往往缺乏必要的辅助性注释说明。例如，靶标蛋白丰度或细胞系中异构体表达水平等关键因素，都可能影响实验结果。对于评估翻译后修饰抗体或必需基因抗体等特殊场景，可能需要额外优化方案。这种坦诚透明的态度，恰恰彰显了平台对科学严谨性的不懈追求。

致科研同仁的行动倡议

对制造商而言，YCharOS 不仅是一套验证方案，更是推动持续改进的催化剂。该平台为诸如 Cell Signaling Technology 等企业提供了关于抗体特异性的积极验证，并在必要时给予关键反馈，促使我们不断重新评估并优化产品体系。

秉承对抗体品质的永恒追求，我们诚挚建议所有用户：

1. 选择抗体时参考 YCharOS 验证数据
2. 查阅产品页上详尽的应用特异性验证数据（含 Simple Western、IHC、ChIP、流式细胞术等）及大量同行评议文献引用
3. 联系我们的技术支持团队以获取：
   1. CST 科学家提供的特定应用指导 
   2. 广泛的批间一致性测试查询服务
   3. 针对您特定研究需求的建议
4. 分享您使用产品的体验 

携手推动科学进步

在 CST，我们坚信优质工具成就卓越科研。YCharOS 平台对我们而言不仅是方法学革新，更是一场践行我们理念的运动，它与我们长期以来对严谨、可重复性科研的追求不谋而合。通过优先考量特异性标准、数据透明化和协作开发，我们不仅提供抗体产品——更致力于构建以可靠科学知识和工具为基础的研究未来，让全球科研工作者能以更高的可信度和效率开展科学探索。

CST 很自豪成为一家由活跃的研究科学家创立并领导的企业。这促使我们以研究者视角开展抗体开发，并矢志追求最高产品质量标准——这体现在严苛的抗体验证流程、详尽的产品数据披露，以及广泛的技术支持。

详细了解我们屡获殊荣的抗体产品，见证我们如何通过 YCharOS 等实践践行品质承诺以推动科学发现：

选择以下参考文献

1. Berglund L, Björling E, Oksvold P, et al. A genecentric Human Protein Atlas for expression profiles based on antibodies. Mol Cell Proteomics. 2008;7(10):2019-2027. doi:10.1074/mcp.R800013-MCP200
2. Baker M. Many researchers fail to validate antibodies for their experiments. Nature. 2016;doi:10.1038/nature.2016.20192    
3. Andersson S, Sundberg M, Pristovsek N, et al. Insufficient antibody validation challenges oestrogen receptor beta research. Nat Commun. 2017;8:15840. Published 2017 Jun 15. doi:10.1038/ncomms15840
4. Voskuil JLA, Bandrowski A, Begley CG, et al. The Antibody Society's antibody validation webinar series. MAbs. 2020;12(1):1794421. doi:10.1080/19420862.2020.1794421
5. Uhlen M, Bandrowski A, Carr S, et al. A proposal for validation of antibodies. Nat Methods. 2016;13(10):823-827. doi:10.1038/nmeth.3995
6. Biddle MS, Virk HS. YCharOS open antibody characterisation data: Lessons learned and progress made. F1000Res. 2023;12:1344. Published 2023 Oct 16. doi:10.12688/f1000research.141719.1
7. Ayoubi R, Ryan J, Biddle MS, et al. Scaling of an antibody validation procedure enables quantification of antibody performance in major research applications. Elife. 2023;12:RP91645. Published 2023 Nov 23. doi:10.7554/eLife.91645
8. Monteiro, F.L., Voskuil, J.L.A. & Williams, C. YCharOS protocol for antibody validation. Nat Protoc. 2024. https://doi.org/10.1038/s41596-024-01108-6    
9. Ayoubi R, Ryan J, Gonzalez Bolivar S, et al. A consensus platform for antibody characterization. Nat Protoc. Published online 2024 年 12 月 17 日. doi:10.1038/s41596-024-01095-8