支原体污染：防止、测试和处理步骤

任何形式的细胞培养污染都会浪费您的时间，毁掉您的辛苦工作，而支原体污染尤其具有毁灭性。

支原体是极小的细菌，其细胞膜周围没有细胞壁。支原体不仅无法用光学显微镜检测到、难以消灭，还能够迅速渗透整个实验室，而且感染还会极大地影响您的实验结果，因为支原体会影响培养细胞的形态和生理特征。因此，您会发现支原体绝不仅仅是一个令人烦恼的问题，它还在不可重复的研究中起着主要作用。  

上图：有支原体污染的 OVCAR8 细胞。下图：清洁 A549 细胞

防止支原体污染

处置支原体的最好方法是首先避免污染。

1. 始终穿戴适当的个人防护设备 (PPE)，包括手套和干净的实验服。谨记，至少每周更换一次实验服。
   
2. 采用无菌技术对保护您的细胞和预防污染至关重要。以下是一些最佳做法：
   • 让细胞培养层流柜保持整洁，从而气流无阻。
   • 在物品上喷洒 70% 乙醇后再放进培养罩。
   • 盖好平板和瓶子。
   • 避免在无盖器皿上方舞动手掌和手臂。
     
3. 立即清理溢出物。
4. 保持培养箱洁净，避免飞溅物和溢出物，并维持严格的清洁计划。定期用漂白剂清洁培养箱及每周更换或清洁一次接水盘将有助在内部防止细胞污染。
5. 在指定的培养箱中隔离任何新的或先前未检测的细胞系。支原体尤其擅长从一个区域扩散到另一个区域。在您能进行检测之前，切勿将新的或有疑问的细胞系放在靠近其他细胞的地方，以确保它们没有被污染。

测试支原体污染

由于支原体太小，以致于无法观察到，故而您需要一种可靠的探测方法。

1. 市场上可提供许多商业华检测试剂盒，有时同时使用多种方法来确保获得明确的结果。成本、等待结果的时间以及实验室可用设备等因素
2. 坚持定期测试支原体计划，或每次您冷冻新的细胞库时，取得样品测试支原体。这将确保您的实验室有可信、未受污染的细胞库可供随时使用。

处理支原体污染

哦，不好！您的细胞支原体检测结果为阳性。现在该怎么办？

1. 当然，您该做的第一件事是把已污染的细胞与您其他的易受污染的培养物分开。一旦隔离了被污染的平板或烧瓶后，您便可以开始处理以清除支原体。希望这能抢救您的细胞。
   
2. 与支原体检测一样，市场上也有多种抗生素可用于去除支原体。将 Plasmocin（最常用的处理手法之一）按 25 𝝻g/mL 添加至培养基，维持 1-2 周。 
3. 对感染的细胞完成处理方案后，必须将这些细胞在无抗生素情况下培养 1-2 周，然后复测以了解处理手法是否成功。

如果处理后的支原体检测结果呈阳性，您可以在间隔更长一段时间后再处理细胞。在绵延不绝情况下，应考虑诸如时间和所提及细胞的价值等因素，以辅助您决定是否应该尝试一种不同的抗生素处理手法，或是否丢弃细胞以保护实验室余者的健康和福祉。

结论

实验室污染是一件让人头疼的事，严重到足以永久地提醒人们预防污染的价值和重要性。谨慎地无菌作业并保持细胞免受污染物如支原体影响可有助确保您的细胞健康及确保您的实验数据可靠。